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水云间秋忆
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yeting1976

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前面我们讲了拿到一个质粒后对它做快速的基本了解,接下来重点部分就是如何快速阅读质粒图谱。                                                 质粒的命名 拿到一个质粒,第一眼看到的肯定是它的名字,那质粒是怎么命名的?     最初发现的质粒均有研究者根据其表型,大小特征命名,如F因子(fertility factor,致育因子),R质粒(resistance factor)等。后来提出了一个比较规范的命名规则。 质粒命名规则 1. 第一个字母一律用小写p表示 2. 后面两个字母应该大写,可以采用发现者人名,实验室名称,表型形状或其他特征的英文缩写 例如:UC----University of California BR----Bolivar and Rodrigue 3 编号为阿拉伯数字,用于区分同一类型的质粒 后续比较复杂的质粒命名都是对Vector base质粒按照自身需求改造后进行重新命名。 如下图的质粒 pLV-puro-N-Flag-Snrnp40pLV+抗性puro基因+N端FLG标签+插入基因snrnp40 基本上复杂命名的组成为 p(骨架载体)+启动子/标签+(物种缩写)插入基因+筛选标签+抗性基因+过表达/敲除 下面是常见的骨架载体缩写: RP: Regular plasmid,常规质粒载体 LV: Lentivirus,慢病毒载体 MMLV: MMLV retrovirus,MMLV逆转录病毒载体 AV: Adenovirus,腺病毒载体 AAV: Adeno-associated virus,腺相关病毒载体 Tol2: Tol2 transposon,Tol2转座子 ET, BAD or CS:各种细菌蛋白表达载体 SC: Saccharomyces cerevisiae,酿酒酵母蛋白表达载体 BV: Baculovirus,昆虫杆状病毒蛋白表达载体 插入基因物种人(human),小鼠(mouse),大鼠(rat)分别对应缩写字 母“h”、“m”、“r”以及其他的一些物种等,都是类似的     经过上面的介绍,大部分质粒你拿到之后就能对其想表达的组成有个大概的了解,下面就是质粒图谱的介绍 质粒的寄主范围是由ori区决定的                                                       复制起点     复制起点(ori):控制复制的起始位点,是基因组上复制起始的一段序列,是由起始复制子(复制子:在质粒DNA中能进行自主复制并维持正常拷贝数的一段最小的DNA序列。)及其调控元件组成。ori富含A-T,氢键少,便于打开进行复制。 复制起点影响着质粒的拷贝数,尤其是复制子的类型决定复制质粒拷贝数。所以复制起点与前面讲的严紧型和松弛型质粒有密切的联系。常见的复制子有pMB1 ,ColE1等(具体的其他可以自行在addgenen上进行了解,顺便帮助自己熟悉addgene这个很重要的网站:http://www.addgene.org/)。如下图的pUC系列和pBRR系列都是pMB1复制子,但是质粒图谱上是看不出来的,基本上做个了解即可,自己做到心里有数质粒是什么类型的,拷贝数多少,防止质粒浓度达不到要求。     复制起点还有一个比较重要的点就是穿梭质粒。一个质粒上有两个复制起点,为了使质粒可以在不同类型宿主中存活和复制。上面的都是一个ori复制点,下面的一个质粒有两个ori复制起点,需要仔细找才能发现另外一个。 一个比较明显是ori,有的图谱上会标ori(-)表示革兰氏阴性菌;还有一个圈住的也是一个复制起点,是能repF,金黄色葡萄菌中一种复制子。 最后一个小点是f1 ori 是控制质粒在f1噬菌体中复制的复制起点,形成ssDNA(single strain DNA 单链DNA)。 欢迎关注小乔爱科研公众号进行探讨和指正,谢谢!

转座子英文

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七月的蟹

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1.T-DNA:土壤农杆菌(Agrobacterium)Ti质粒上转入植物细胞的DNA片段。 2.端粒酶(Telomerase):在真核生物染色体末端复制DNA的酶复合物。 3.四环素(Tetracycline):一类结构中含有四个苯环的抗生素。 4.嗜热微生物(Thermophile):最适生长温度在45摄氏度和80摄氏度之间的生物体。 5.热聚体(Thermosome):一种热休克蛋白(分子伴侣)复合物,能够重新折叠超嗜热古生菌中已部分热变性的蛋白质。 6.类囊体(Thylakoid):叶绿体内含有光合作用色素的片层膜。 7.Ti-质粒(Ti plasmid):是一种土壤农杆菌的质粒,它可携带基因由细菌宿主转入植物宿主。 8.中毒性休克综合症(Toxic shock syndrome,TSS):宿主抗金黄色葡萄球菌外毒素而引起的急性系统性休克。 9.转导(Transduction):通过病毒将一个寄主的基因转给另一个寄主的过程。 10.转运RNA(Transfer RNA;tRNA):在翻译过程中作为衔接分子,它既对特定的氨基酸有专一性,又对一种或一种以上的密码子有专一性。 11.转化(Transformation):特指细菌中游离DNA的转移过程(见第九章,选择使用)。 12.翻译(Translation):以mRNA的遗传信息为模板合成蛋白质。 13.转录(Transcription):以DNA为模板,合成RNA。 14.转录组(Transcriptome):在特定的条件下,一种生物所产生的所有的mRNA。 15.转基因生物(Transgenic organism):携带插入的克隆DNA,并可使其稳定遗传的动物或植物。 16.转肽作用(Transpeptidation):肽聚糖合成过程中胞壁酸残基之间形成的肽键连接。 17.可转座因子(Transposable element):能从染色体的一个位点转移(转座)到另一个位点的遗传因子。 18.转座子(Transposon):转座因子中的一类,带有与转座有关的基因。 19.结核菌素实验(Tuberculin test):一种皮试,用于检测以前有无结核分

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