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目前,最主流的腺病毒载体系统有Adeasy系统和AdMax系统。Adeasy系统:通过原核重组极大提高了腺病毒的重组效率。其具体的构建步骤如下图。 AdMax系统:Cre/LoxP体系改造后的真核腺病毒包装体系,进一步增加的操作的便捷,同时滴度较Adeasy有进一步提高。步骤如图所示。 下面是一些经典的AdMax系统质粒图谱:
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在辅助腺病毒存在下,AAV可以高效定点整合至人染色体中;而现在的AAV载体已经不需要腺病毒辅助,不插入宿主的基因组,而是游离于宿主细胞基因之外,呈卫星状稳定表达。腺相关病毒载体(AAV)体内的感染效率极高。不同血清型可以相对特异性的感染心脏,肝脏,骨骼肌等。腺相关病毒是RG1(最安全级别)的基因治疗载体,完全无具有潜在致病性。而腺病毒是RG2,慢病毒是RG2,逆转录病毒是RG3 。 AAV载体容量小,目前最多只能容纳4.7 kb外源DNA片段;野生型的AAV在40%-80%的成人中存在过感染,在腺病毒存在的情况下可能会引起免疫排斥。
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疫苗其实是特殊处理过的病毒,打到人体里不会致病,但能让免疫系统认识病毒。目前国内研发的新冠疫苗,主要包括灭活疫苗、重组蛋白疫苗、腺病毒载体疫苗、减毒流感病毒载体活疫苗、核酸疫苗这5条技术路线。重组新型冠状病毒疫苗(5型腺病毒载体)(Ad5-nCoV)克威莎疫苗是首个获批的国产腺病毒载体新冠疫苗。该疫苗的原理是将新冠病毒的刺突糖蛋白(S蛋白)基因重组到复制缺陷型人5型腺病毒基因中,基因重组腺病毒在体内表达新冠病毒S蛋白抗原,诱导机体产生免疫应答。在有效性方面,该疫苗单针接种14天后可产生有效保护,对所有症状的总体保护效力为68.83%,对重症的保护效力为95.47%。在安全性方面,该疫苗已获得国家药监局的附条件上市批准,安全性和有效性都得到保证。I、II、III期临床试验结果表明,该疫苗安全性良好,全程仅需接种1剂次。
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