冬眠的羽毛
DEAE—纤维素的活化
称取IgDEAE32或52,放入5ml量筒中,加蒸馏水浸泡过夜,观察溶胀后DEAE的体积。根据所需层析柱的柱床体积计算所需DEAE的用量,称取所需DEAE用蒸馏水浸泡过夜,其间换几次水,每次除去细小颗粒。
抽干,改用0.5mol/LNaOH溶液浸泡1h以上,抽干(可用布氏漏斗),用无离子水漂洗,使pH至8左右(用pH试纸检查)。再改用0.5mol/LHCl溶液浸泡1h以上,去酸溶液,用无离子水洗至pH6左右。本实验中在用前应以0.0175mol/L,pH6.7磷酸盐缓冲液,浸泡平衡后使用。
用过的离子交换剂可以反复使用,使其恢复原状的方法俗称“再生”。再生并非每次用酸、碱反复处理,通常只要“转型”处理即可。所谓转型就是使交换剂带上所希望的某种离子,如希望阳离子交换剂带上NH+4则可用NH4OH浸泡,如希望阴离子交换剂带上Cl—则用NaCl溶液处理。
本实验中DEAE—纤维素在酸碱处理后,用0.0175mol/L,pH6.7磷酸盐缓冲溶液浸泡即可转型,以HPO4取代DEAE中的OH—。一般由于DEAE—纤维素使用后因带有大量杂蛋白,所以再生时,先用0.5mol/L NaOH浸洗,用去离子水洗至pH8左右,再转型,即可再使用。
参考资料来源:百度百科-DEAE-纤维素
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