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系统由储液器、泵、进样器、色谱柱、检测器、记录仪等几部分组成。储液器中的流动相被高压泵打入系统，样品溶液经进样器进入流动相，被流动相载入色谱柱(固定相)内，由于样品溶液中的各组分在两相中具有不同的分配系数，在两相中作相对运动时，经过反复多次的吸附-解吸的分配过程，各组分在移动速度上产生较大的差别，被分离成单个组分依次从柱内流出，通过检测器时，样品浓度被转换成电信号传送到记录仪，数据以图谱形式打印出来高效液相色谱仪主要有进样系统、输液系统、分离系统、检测系统和数据处理系统，下面将分别叙述其各自的组成与特点。1．进样系统 液相色谱仪一般采用隔膜注射进样器或高压进样间完成进样操作，进样量是恒定的。这对提高分析样品的重复性是有益的。2．输液系统 该系统包括高压泵、流动相贮存器和梯度仪三部分。高压泵的一般压强为l．47～4．4X10Pa，流速可调且稳定，当高压流动相通过层析柱时，可降低样品在柱中的扩散效应，可加快其在柱中的移动速度，这对提高分辨率、回收样品、保持样品的生物活性等都是有利的。流动相贮存器和梯度仪，可使流动相随固定相和样品的性质而改变，包括改变洗脱液的极性、离子强度、PH值，或改用竞争性抑制剂或变性剂等。这就可使各种物质（即使仅有一个基团的差别或是同分异构体）都能获得有效分离。分离系统 该系统包括色谱柱、连接管和恒温器等。色谱柱一般长度为10～50cm（需要两根连用时，可在二者之间加一连接管），内径为2～5mm，由"优质不锈钢或厚壁玻璃管或钛合金等材料制成，住内装有直径为5～10μm粒度的固定相（由基质和固定液构成）．固定相中的基质是由机械强度高的树脂或硅胶构成，它们都有惰性（如硅胶表面的硅酸基因基本已除去）、多孔性（孔径可达1000?）和比表面积大的特点，加之其表面经过机械涂渍（与气相色谱中固定相的制备一样），或者用化学法偶联各种基因（如磷酸基、季胺基、羟甲基、苯基、氨基或各种长度碳链的烷基等）或配体的有机化合物。因此，这类固定相对结构不同的物质有良好的选择性。例如，在多孔性硅胶表面偶联豌豆凝集素（PSA）后，就可以把成纤维细胞中的一种糖蛋白分离出来。 另外，固定相基质粒小，柱床极易达到均匀、致密状态，极易降低涡流扩散效应。基质粒度小，微孔浅，样品在微孔区内传质短。这些对缩小谱带宽度、提高分辨率是有益的。根据柱效理论分析，基质粒度小，塔板理论数N就越大。这也进一步证明基质粒度小，会提高分辨率的道理。 再者，高效液相色谱的恒温器可使温度从室温调到60C，通过改善传质速度，缩短分析时间，就可增加层析柱的效率。液相色谱仪常见故障处理1、气泡溢出 流动相内有气泡，关闭泵，打开泄压阀，打开purg键，清洗脱气，气泡不断从过滤器冒出，进入流动相，无论打开purge键几次，都无法清除不断产生的气泡。原因过滤器长期沉浸于乙酸铵等缓冲液内，过滤器内部由于霉菌的生长繁殖，形成菌团，阻塞了过滤器，缓冲液难以流畅地通过过滤器，空气在泵的压力作用下经过滤器进入流动相。处理过滤器浸泡于5%硝酸溶液中，超声清洗几分钟即可;亦可将过滤器浸泡于5%硝酸溶液中12～36小时，轻轻震荡几次，再将过滤器用纯水清洗几次，打开泄压阀，打开purge键清洗脱气，如仍有气泡不断从过滤器冒出，继续将过滤器浸泡于5%硝酸溶液中，如没有气泡不断从过滤器中冒出，说明过滤器内部的霉菌菌团已被硝酸破坏，流动相可以流畅地通过过滤器。打开泄压阀，打开泵，流速调至0～0ml/min，纯水冲洗过滤器1小时左右。即可将过滤器清洗干净。关闭泄压阀，纯甲醇冲洗半小时即可。2、柱压高原因 (1)缓冲液盐分如(乙酸铵等)沉积于柱内; (2)样品污染沉积。处理对于第一种情况先用40～50℃的纯水，低速正向冲洗柱子，待柱压逐渐下降后，相应提高流速冲洗，柱压大幅度下降后，用常温纯水冲洗，之后用纯甲醇冲洗柱子30分钟;对于第二种情况，由样品的沉积引起污染的C18柱，和纯水反向冲洗柱子，然后换成甲醇冲洗，接着用甲醇+异丙醇(4+6)冲洗柱子(冲洗时间的长短由样品污染的情况而定)，再用换成甲醇冲洗，然后用纯水冲洗，最后甲醇冲洗正向冲洗柱子30分钟以上。3、既无压力指示，又无液体流过 (1)泵密封垫圈磨损; (2)大量气泡进入泵体。处理对于第一种情况，更换密封垫圈;对于第二种情况，在泵作用的同时，用一个50ml的玻璃针筒在泵的出口处帮助抽出空气。4、压力波动大，流量不稳定 原因系统中有空气或者单向阀的宝石球和阀座之间夹有异物，使得两者不能密封。处理工作中注意观察流动相的量，保证不锈钢滤器沉入储液器瓶底，避免吸入空气，流动相要充分脱气。如为单向阀和阀座之间夹有异物，拆下单向阀，放入盛有丙酮的烧杯用超声波清洗。5、出峰不佳，峰分叉 (1)色谱柱被污染; (2)柱头填料塌陷。处理对于第一种情况，先用纯水反向冲洗柱子，然后换成甲醇冲洗，接着用甲醇+异丙醇(4+6)冲洗柱子(冲洗时间的长短由样品污染的情况而定)，再换成甲醇冲洗，然后用纯水冲洗，最后甲醇冲洗正向冲洗柱子30分钟以上。如冲洗后依然出峰不佳，则考虑第二种情况。对于第二种情况，拧开柱头，检查柱填料是否硬结或塌陷。去除硬结部分(污染的填料)，装入新填料，滴一滴甲醇，填料下陷，再填，用与柱内径相同的顶端平滑的不锈钢杆压紧，再填平，滴甲醇，再压紧反复几次，直至装满填平。柱头用甲醇冲洗干净，擦净柱外壁的填料，拧紧柱头，用纯甲醇冲洗30分钟以上。6、峰面积重复性不佳 (1)进样阀漏液; (2)加样针不到位。 (3)液量不足 处理对于第一种情况更换进样阀垫圈;对于第二种情况保证加样针插到底，注射样品溶液后须快速、平稳地从LOAD状态转换到INJECT状态，以保证进样量的准确。日常工作中，液相色谱仪的保养非常重要，如要注意不要让空气进入输液系统和高压泵中，储液器内的溶液如长时间未用应清洗储液器并更换溶液，每次用完色谱仪后缓冲液要用纯水冲洗干净，防止无机盐析出或沉积;样品的前处理也很重要，任何样品都要尽可能地去除杂质，完全溶解，尽量减少对色谱柱的污染，以延长色谱柱的使用寿命，同时避免注射过浓的样品溶液，以免残留液在进样阀内析出固体引起堵塞;色谱柱作好标记，用于不同分析目的的色谱柱不要混用等。 
液相色谱仪根据各种各样的化工互作用力来分离混合物。这种互作用力通常是分析物及分析管柱之间的一种非共价性质。使用高效液相色谱时，液体待检测物在不同的时间被注入色谱柱，通过压力在固定相中移动，由于被测物中不同物质与固定相的相互作用不同，不同的物质顺序离开色谱柱，通过检测器得到不同的峰信号，每个峰顶都代表一个另外化合物的种类，最后通过分析比对这些信号来判断待测物所含有的物质。以液体为流动相而设计的色谱分析仪器称为液相色谱仪。采用高压输液泵，高效固定相和高压灵敏检测器等装置的液相色谱仪成为高效液相色谱仪。高效液相色谱仪种类繁多，但不论何种类型的高效液相色谱仪，基本上都分为4个部分：高压输液装置，进样系统，分离系统和检测系统。拓展资料：高效液相色谱法（英语：high performance liquid chromatography，缩写 HPLC），又译高效液相层析法，以前曾指高压液相层析法（high pressure liquid chromatography），是一种色谱分析技术，用来分离混合物，以确认并量化各个成分的比例。它依赖泵加压样品以令其通过填充有吸附剂的压力柱，导致样品的各个成分因而分离。高效液相色谱法常用于生物化学和分析化学。
液相色谱仪使用及工作原理。听说研究生阶段要掌握很多的仪器操作，那这样岂不是特别辛苦鸭。这个回答将简单介绍液相色谱仪的原理、组成和操作流程，教你学习，带你飞。一、什么是色谱呢?色谱的本质是一种分离分析方法。常见的分离方法有蒸馏、离心、电泳、过滤等。色谱是目前最有效的分离方法之一。色谱法的原理：利用混合物中各组份在不同的两相中溶解、分配、吸附等性质的差异，当两相作相对运动时，使各组分在两相中反复多次受到各作用力而达到相互分离。两相中有一相是固定的，叫作固定相(Stationary Phase)，有一相是流动的，称为流动相(Mobile phase)，流动相又叫洗脱剂、溶剂。相(Phase)：物理化学术语，特指在某一系统中，具有相同成分及相同物理、化学性质的均匀物质。各相之间有明显可分的界面。二、液相色谱仪的组成1、输液系统包括溶剂柜、真空脱气机、溶剂混合器、高压泵等，其中核心部分是泵；泵的作用提供足够的驱动力使流动相通过填充紧密的色谱柱。洗脱方式也分为两种：（1）等度洗脱：在同一分析周期内流动相组成保持恒定，适合于组分数目较少，性质差别不大的样品。（2）梯度洗脱：采用两种（或多种）不同极性的溶剂，在分离过程中按一定程序连续改变流动相的浓度配比和极性的一种洗脱模式。用于分析组分数目多、性质差异较大的复杂样品。2、进样系统把分析试样有效地送入色谱柱进行分离。一般有自动进样器和手动进样器，进样量应不小于定量环体积的5-10倍（最少3倍）。3、分离系统主要是色谱柱，色谱柱是一根装满填料的管子。色谱柱的材料有不锈钢、塑料、玻璃等，其尺寸（内径、长短）不尽相同；色谱柱填料主要有硅胶基质和聚合物基质，填料的粒径不尽相同。4、检测器对检测器的要求：灵敏度高、重现性好、线性范围宽、死体积小、对温度及流量的变化不敏感等。主要有紫外检测器、荧光检测器、示差检测器等。示差检测器是一种通用型检测器，理论上可以检测几乎所有的化合物。其原理是基于含样品的洗脱剂和洗脱剂二者折光指数的差异。示差检测器受压力变化、温度变化、流动脉冲的影响较大，不适合进行梯度洗脱。三、液相色谱仪操作流程1、开机：依次打开脱气机、色谱泵、检测器、计算机电源；待各设备自检正常后，启动色谱管理系统。2、流动相准备：过滤，脱气。3、色谱泵排气 4、安装色谱柱 5、平衡流动相（有机溶剂与缓冲盐溶液切换时等易产生沉淀，需先使用90%超纯水/10%甲醇作为流动相冲洗系统）6、数据采集、进样7、冲洗管路及色谱柱8、数据处理9、关机10、记录相关信息 四、液相色谱图名词术语色谱峰(Peak):色谱柱流出组分通过检测器时产生的响应信号。峰底(Peak Base):峰的起点与终点之间连接的直线。峰高(Peak Height):峰最大值到峰底的距离。切线峰宽(Peak Width):在峰两侧拐点处所作切线与峰底相交两点之间的距离。半(高)峰宽(Peak Width at Half Height):通过峰高的中点作平行于峰底的直线，其与峰两侧相交两点之间的距离。峰面积(Peak Area):峰与峰底之间的面积，又称响应值。各位同学，都停一下安排一波学习妥了，一起学习到天亮到最后，希望这篇小贴士对研究生活的你有一点点帮助，早出结果，早发文章，我们都会有美好的未来der！以上贡献者：图片来源 | 网络数据文字编辑 | 刘肇龙 王军老师图文编辑 | 刘肇龙 瞿兴玥 李奇科图文审核 | 宣传部分享来源 | 就不告诉老先生
